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枸杞多糖的檢測方法

作者:斯諾特生物技術有限公司瀏覽次數:時間:2015-07-17 21:03:38

枸杞多糖的檢測方法

1、方法原理
粗多糖在硫酸的作用下,水解成單糖,并迅速脫水生成糖醛衍生物,與苯酚
縮合成有色化合物,用分光光度法測定樣品在粗多糖含量。
2、主要設備和儀器
設備721型分光光度計(上海第三分析儀器廠)
試劑
枸杞多糖標準液:精確稱取105℃干燥恒重的標準枸杞多糖0.1000g,置100mL容量瓶中加熱蒸餾水溶解稀釋至刻度,其濃度為1.0mg/mL,用稀釋成濃度為0.1mg/mLd的標準工作液。
5%苯酚溶液:取苯酚100g,沙浴蒸餾,收集180℃-182℃溜分,稱取此餾分5g,用水溶解后,定容至100mL棕色容量瓶中備用(現用現配)。
3、測定步驟
3.1、最大吸收波長的選擇
精密吸取0.04mg/mL無水枸杞多糖溶1.0

mL,置10mL具塞試管中,加入蒸餾水使體積為2.0mL,再加苯酚試液1.0mL,搖勻,迅速滴加濃硫酸5.0mL,搖勻后放置5min,置沸水浴中加熱15min,取出后冷卻至室溫。以蒸餾水代替糖溶液如加上法配制空白。用721分光光度計在470-510nm測定吸光度,測定最大吸收波長為490±nm。
3.2、標準曲線的繪制
精密吸收濃度為0.1mg/mL的枸杞多糖標準,標準工作液0、0.20、0.30、0.40、0.60、0.80mL,分別置于10mL具塞試管中,各加蒸餾水使體積為2.0mL,再加苯酚試液1.0mL,搖勻,迅速滴加濃硫酸5.0

mL,搖勻后放置5min,置沸水浴中加熱15min,取出后冷卻至室溫。以蒸餾水代替糖溶液如上法配制空白。用721分光光度計,1cm比色皿,在490nm處測定吸光度,繪制葡萄糖濃度-吸光度工作曲線。結果濃度在0.010-0.04mg/mL范圍內與吸光度呈現性關系。
回歸方程Y=7.52×10-3X+1.13×10-3,

Y=0.9997(n=6)。
3.3、含量測定
3.31、多糖的提取與精制

取300mL,用氟仿多次萃取,以除去蛋白質,加活性炭1%脫色,抽濾,濾液加入95%乙醇,使含醇量達80%,靜置過夜。過濾,殘渣用無水乙醇、丙酮、乙醚多次洗滌,真空干燥,即得粗多糖。
3.32、供試液的配制

精密稱取粗多糖粉末0.2000g,置于50mL容量瓶中,定容,搖勻,即得供試品溶液。
3.33、樣品含量測定

精密度吸取供試品溶液2.0mL,按“標準曲線繪制”項下方法分別測定吸光度。
結果計算:
多糖含量(%)=(C·D)/V×100
式中:
C-供試液葡萄糖濃度(mg/mL);
D-代試液的稀釋因素;
V-供試液體積(mL)。

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